發布日期:2025-02-13 17:18 瀏覽次數: 作者:admin
1 開發目的
現有的GPX試劑盒是酶法試劑盒,是GPX測定的經典方法。具有特異性強,操作簡便,穩定性高的特點。
由于酶法試劑盒含酶試劑,成本比較高,相應地試劑盒價格就有點小貴。我司現有兩種酶法試劑盒:(1)酶標儀使用,貨號GPX-1-W,規格為100管/96樣,售價1500/盒;(2)分光光度計,貨號GPX-2-W,規格50管/48樣,售價850元/盒。
考慮到有些用戶預算比較緊張,我們研發了低成本的DTNB法GPX檢測試劑盒。
2 研發過程
為了降低成本,我們放棄了酶試劑,轉而使用DTNB直接檢測GSH的減少量。但是DTNB法存在一些問題:
(1)測定過程中反應底物GSH的濃度會持續降低,過低的GSH濃度可能會影響反應的速率,而過高的濃度則會導致最終顯色過深無法測定;
(2)樣本中能與DTNB產生顯色反應的成分比較復雜;
(3)反應時間過長會由于反應進入平臺期影響結果,反應時間過短則無法檢測到明顯變化。
為了解決這些問題,我們使用常見的植物樣本如水稻葉片、擬南芥葉片等對反應體系與底物進行了一系列摸索與實驗驗證后,成功研發了DTNB法GPX活性檢測試劑盒。
3 方法對比
酶法 | DTNB法 | |
優勢 |
(1)反應體系中的GSH濃度始終維持在較高水平,不會影響反應速率,穩定性強; (2)反應的特異性很強,檢測結果更加準確; (3)檢測操作一步完成,更加簡便快速。 |
(1)價格更加便宜; (2)不需要紫外分光光度計和石英比色皿,儀器要求更低。 |
劣勢 |
(1)成本高,價格貴; (2)個別情況下紫外波長存在干擾。 |
(1)酶活性過高或者過低都可能影響測定結果,適用范圍更小; (2)操作步驟更復雜,耗時更長; (3)特異性和靈敏度相對較差。 |